宿迁气密检漏仪厂家

　　核心词：宿迁 检漏仪 厂家 
　　SSR称为简单重复序列,也可以称为微卫星DNA。SSR是由1～6个核苷酸为重复序列组成的串联重复序列,这些简单重复序列随机、均匀,并且广泛存在于真核生物的基因组上。
　　1、宿迁气密检漏仪厂家:分子标记是以个体间遗传物质中核苷酸序列的变异为基础的遗传标记
　　分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记,是DNA水平遗传多态性的直接反映。以这种简单重复序列为基础的标记技术被称为分子标记技术,SSR分子标记由Moore等于1991年创立。
　　2、宿迁气密检漏仪厂家:已广泛应用于农作物品种的真伪鉴定和纯度鉴定
　　由于SSR分子标记具有非组织和发育阶段特异性、不易受外界环境影响、多态性高、在基因组中分布广泛、呈共显性遗传等优点,目前已经被广泛应用在农作物品种的真实性鉴定和纯度鉴定中。2014年我国农业部修订了2007年版本的水稻品种鉴定标准,发布了行业推荐标准NY/T1433—2014《水稻品种鉴定技术规程:SSR标记法》,因分子标记检测具有快速、稳定等特点,该技术规程在全国广泛应用;但是分子检测结果的可靠性和准确性,与实验条件和实验操作人员的实验技能有一定的关系,为提高江苏水稻品种真实性和纯度鉴定结果的准确性,本研究对江苏省种子管理站种子质量检验室现有的实验条件进行了组合比较,拟筛选较适合江苏水稻品种真实性和纯度鉴定的实验条件,在江苏范围内推广应用。以水稻品种淮稻5号和连粳7号为试验材料。选取NY/T1433—2014《水稻品种鉴定技术规程:SSR标记法》中12对SSR引物,引物名称及序列详见表1,引物由上海英俊生物技术有限公司合成。
　　3、宿迁气密检漏仪厂家:DNA提取
　　DNA提取:选用OMEGA公司生产的植物基因组DNA提取试剂盒提取2个品种的DNA。TaqDNA聚合酶:选用TaKaRa公司、天根生物科技(北京)有限公司及生工生物工程(上海)股份有限公司的TaqDNA聚合酶。使用赛默飞世尔科技公司的NanoDrop2000超微量分光光度计,检测提取的DNA模板的浓度和质量;分别用BIO-RAD公司生产的Mycycler和AgilentTechnologies公司生产的SureCycler8800扩增仪进行PCR扩增;采用美国Bio-rad伯乐GelDocXRSystem凝胶成像系统对银染后的聚丙烯酰胺凝胶拍照。用试剂盒提取完DNA后,用超微量分光光度计检测2个品种的DNA模板浓度,将其分别稀释到相同浓度使用。
　　4、宿迁气密检漏仪厂家:本实验采用三种不同来源的taqdna聚合酶
　　本实验采用50℃、55℃及60℃3个退火温度和3种不同来源的TaqDNA聚合酶在2种PCR扩增仪上对2个品种的DNA模板PCR扩增,为便于标记图片和分析结果,分别对实验条件进行编号(表,并按照表3的实验条件组合进行。
　　3、宿迁气密检漏仪厂家:DNA提取试剂盒提取DNA模板
　　用DNA提取试剂盒提取的DNA模板,微量分光光度计检测后结果见表4。D280nm是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长,D260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长,D230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长。纯DNA的D260nm/D280nm比值为1.8,纯DNA和RNA的D260nm/D230nm比值为2.5。检测结果表明,所提取DNA模版质量较高,蛋白质、RNA、多糖和酚类等杂质基本去除,能够满足进行SSR分子标记分析的质量要求(表。根据每个样品的原始DNA浓度,稀释至50ng/μL备用。分别为aA、aA、aA,aB、aB、aB,bA、bA、bA,bB、bB、bB,cA、cA、cA,cB、cB、cB。
　　6、宿迁气密检漏仪厂家:以AA
　　以aA、aA、aA,aB、aB、aB等2组组合电泳图谱(图为例,对PCR产物电泳谱带的清晰度比较可知,50℃退火温度非特异性产物较多,电泳谱带弥散背景较多;55℃退火温度,扩增特异性目标条带清晰,电泳谱带背景干净,便于后续的比较分析;60℃退火温度扩增特异性目标条带不及55℃退火温度扩增特异性目标条带清晰,且其他5组组合中也是如此,因此,以55℃退火温度的PCR产物较有利于水稻品种真实性SSR标记的检测。
　　7、宿迁气密检漏仪厂家:9种实验条件组合可比较AA
　　个实验条件组合中有9组组合可比较2种不同品牌扩增仪的PCR产物的质量,分别为aA、aB,bA、bB,cA、cB,aA、aB,bA、bB,cA、cB,aA、aB,bA、bB,cA、cB。以其中2组组合bA、bB和cA、cB电泳图谱(图为例,结果表明无论是条带特性高低与否、背景清晰与否,仪器对结果的影响并不明显,其他几个组合的结果亦如此,本实验表明2种PCR仪性能比较一致,均适合水稻品种真实性SSR标记的检测。个实验条件组合中有6组组合可比较3种不同品牌的聚合酶扩增后的结果,分别为aA、bA、cA,aA、bA、cA,aA、bA、cA,aB、bB、cB,aB、bB、cB,aB、bB、cB。
　　8、宿迁气密检漏仪厂家:便于后期影像分析；天根Taq-DNA聚合酶PCR产物的电泳条带特异性中等
　　以aA、bA、cA和aB、bB、cB电泳图谱(图为例,TaKaRa及生工TaqDNA聚合酶的PCR产物电泳谱带特异性高,目标条带清楚、杂带少、背景清晰,便于后期的成像分析;天根TaqDNA聚合酶的PCR产物电泳谱带特异性尚可、目标条带较清楚,但杂带多、背景不清晰。
　　9、宿迁气密检漏仪厂家:Takara和bio-Taq-DNA聚合酶适合检测水稻品种的SSR标记
　　其他几个组合的结果亦如此,本实验结果表明TaKaRa及生工TaqDNA聚合酶均适合水稻品种真实性SSR标记的检测,天根TaqDNA聚合酶不适合水稻品种真实性SSR标记的检测。在利用分子标记法鉴定品种真实性的方法中,一个重要环节是PCR的扩增,只有扩增出特异性高、杂质少的扩增产物,才能在后续聚丙烯酰胺凝胶电泳、染色后得到条带清晰、背景干净的指纹图谱,方便后续的读图、分析和鉴定。而影响PCR反映的条件主要分为2个方面:一是PCR体系和反应环境。本研究中主要对这2种影响因素中的TaqDNA聚合酶、退火温度以及不同公司的仪器进行了比较分析,气密检漏仪结果表明,55℃退火温度的PCR产物较有利于水稻品种真实性SSR标记的检测;2种PCR仪性能比较一致,均适合水稻品种真实性SSR标记的检测;TaKaRa及生工TaqDNA聚合酶均适合水稻品种真实性SSR标记的检测。综上所述,如果准备开展SSR标记法对水稻品种真实性进行鉴定,应根据所在实验室的具体情况对PCR的反应体系和反应环境等进行相应的预实验和对比,根据实验室的仪器设备和资金预算等多个方面,选择适合的条件以满足真实性室内分子检测工作开展的需要,保证鉴定结果的准确性。当然,SSR标记法也有着一些局限性,随着生物技术的飞速发展,新技术、新方法也将运用到品种真实性检测中,例如毛细管电泳法、荧光标记法、SNP分子标记法、芯片技术乃至二代、三代测序技术等。但无论哪种新型技术,由于分子方法的结果有不可预见性,在检验室开展和应用一项技术前,都应该根据实验室的具体情况开展一系列的摸索和对比试验,只有这样才能保证实验室检测结果的稳定性、重演性、准确性,真正为农业主管部门、执法部门提供最快速、最有利的技术支撑,在种子市场净化乃至整个种业发展中发挥巨大的作用。
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